小鼠肺组织羟脯氨酸含量测定的实验方法优化

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【作者】陈以文盛春瑞刘珊珊宗晨钟董瑞娟葛东宇王淑艳李丽娜

【关键词】碱水解法羟脯氨酸肺纤维化小鼠肺组织方法优化

【摘要】目的羟脯氨酸(HYP)的检测手段众多,但鲜有精确适用于小鼠肺组织的方法。文章拟建立一种准确、可靠的基于小鼠肺组织的HYP水平测定方法,以更为有效地评估其纤维化发展程度。方法以碱水解法为基础,比较碱水解液浓度及水解时间对小鼠肺组织HYP水平测定结果的影响;比较实验相关条件改变对HYP标准品测定结果的影响;以上述实验结果为基础,比较干燥和湿润的小鼠肺组织HYP水平测定结果。结果通过优化得出,碱水解液最佳浓度为2 mol/L,最佳水解时间为20 min;柠檬酸缓冲液最适pH值为6.0~6.5,适用于氯胺T最佳溶剂为甲醇,氯胺T溶液的最佳反应时间为15 min,高氯酸溶液的最佳反应时间为5 min,4-(二甲氨基)苯甲醛溶液的最佳显色条件为85℃水浴3 min,用干燥肺组织测得的HYP含量[(212.26±8.83)mg/g肺组织]较用湿润肺组织[(162.70±15.04)mg/g肺组织]高(P<0.01)。用改进后方案测得的肺组织HYP水平([(375.20±6.83)mg/g肺组织])明显高于使用优化前[(345.99±8.57)mg/g肺组织]。以HYP标准品浓度为横坐标,对应的OD值为纵坐标绘制标准曲线,其回归方程为y=0.014x+0.0725,相关系数为R 2=0.9991。回收率分别为118.68%、117.38%和117.88%,均在80%~120%之间,说明本法较为可靠。结论建立了一种准确、可靠的基于小鼠肺组织的HYP水平测定方法。

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